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高效液相色谱常见故障的判定及解决方法

2014-11-17 15:52:29 来源：

故障

可能原因

解决方法

(一) 保留时间变化

1 柱温变化

柱恒温，必要时需配置恒温箱

2 等度与梯度间未能充分平衡

至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

3 缓冲液容量不够

用>25mmol/L的缓冲液

4 柱污染

每天冲洗柱

5 柱内条件变化

稳定进样条件，调节流动相

6 柱快达到寿命

采用保护柱

(二) 保留时间缩短

1 流速增加

检查泵，重新设定流速

2 样品超载

降低样品量

3 键合相流失

流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向

4 流动相组成变化

防止流动相蒸发或沉淀

5 温度增加

柱恒温

(三) 保留时间延长

1 流速下降

管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡

2 硅胶柱上活性点变化

用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱

3 键合相流失

同前(二)3

4 流动相组成变化

同前(二)4

5 温度降低

同前(二)5

(四) 出现肩峰或分叉

1 样品体积过大

用流动相配样，总的样品体积小于*峰的15%

2 样品溶剂过强

采用较弱的样品溶剂

3 柱塌陷或形成短路通道

更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件

4 柱内烧结不锈钢失效

更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品

5 进样器损坏

更换进样器转子

(五) 鬼峰

1.进样阀残余峰

每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗

2.样品中未知物

处理样品

3.柱未平衡

重新平衡柱，用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)

每天新配，用抗氧化剂

5.水污染(反相)

通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

(六) 基线噪声

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