关于HPLC的常见问题及解答_气相色谱仪

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关于HPLC的常见问题及解答

2014-08-13 17:08:59 来源：

一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？
答:关于漂移问题：
1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定
2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
二、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
答: 1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
三、问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法
答: 1．样品量不足，解决办法为增加样品量
2．样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3．样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4．检测器衰减太多。调整衰减即可。
5．检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
6．检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7．检测池中有气泡。解决办法为排气。
8．记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9．流动相流量不合适。调整流速即可。
10．检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
四、问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？
答：原因可能有：
1．泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；
2．比例阀失效，更换比例阀即可；
3．泵密封垫损坏，更换密封垫即可；
4．溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；
5．系统检漏，找出漏点，密封即可；
6．梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
五、问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？
答：柱压过高是HPLC柱用户*常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1．拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
2．把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；
3．将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；
4．更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的*佳选择。

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